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甲基化實驗外包,請認準維伯鑫生物科技!

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背景知識:

 

DNA甲基化是最早發(fā)現(xiàn)的DNA修飾途徑之一,大量研究表明,DNA甲基化能引起染色質(zhì)結(jié)構(gòu)、DNA構(gòu)象、DNA穩(wěn)定性及DNA與蛋白質(zhì)相互作用方式的改變,從而控制基因表達。DNA甲基化主要形成5-甲基胞嘧啶(5-mC)和少量的N6-甲基嘌呤(N6-mA)及7-甲基鳥嘌呤(7-mG)。結(jié)構(gòu)基因含有很多CpG結(jié)構(gòu),2CpG2GpC中兩個胞嘧啶的5位碳原子通常被甲基化,且兩個甲基集團在DNA雙鏈大溝中呈特定三維結(jié)構(gòu)。基因組中60% 90%CpG都被甲基化,未甲基化的CpG成簇地組成CpG島,位于結(jié)構(gòu)基因啟動子的核心序列和轉(zhuǎn)錄起始點。DNA的甲基化修飾是基因表達調(diào)控的一種重要手段。

 

 

 

主要檢測方法及原理:

 

亞硫酸氫鈉測序法   Bisulfite Genomic Sequencing PCR,BSP

 

亞硫酸氫鈉測序法是建立在MSP基礎上進一步深入研究CpG島各個位點甲基化情況的方法。重亞硫酸鹽使DNA中未發(fā)生甲基化的胞嘧啶脫氨基轉(zhuǎn)變成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶保持不變,行PCR擴增(引物設計時盡量避免有CpG,以免受甲基化因素的影響)所需片段,則尿嘧啶全部轉(zhuǎn)化成胸腺嘧啶。最后,對PCR產(chǎn)物進行測序,并且與未經(jīng)處理的序列比較,判斷是否CpG位點發(fā)生甲基化。

 

BSP檢測流程圖

 

技術優(yōu)勢:此方法一種可靠性及精確度很高的方法,能明確目的片段中每一個CpG位點的甲基化狀態(tài)。在尋找有意義的關鍵性CpG位點上,有其他方法無法比擬的優(yōu)點。限制性:每次至多能夠檢測450 bp內(nèi)的基因甲基化狀態(tài)。

 

甲基化特異性的PCR     Methylation Specific PCRMSP

 

甲基化特異性是一種特異位點甲基化檢測技術。其基本原理是用亞硫酸氫鈉處理基因組DNA,未甲基化的胞嘧啶變成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不變。因此從理論上講,用不同的引物做PCR,即可檢測出這種差異,從而確定基因有無CpG島甲基化。

 

MSP檢測流程圖

 

MSP檢測結(jié)果

 

    技術優(yōu)勢:這是檢測基因甲基化的經(jīng)典方法,是一種簡便的、特異的、敏感的檢測單基因甲基化的方法??梢杂糜诟咄繕悠坊蛱禺愇稽c甲基化的檢測。限制性:因采用甲基化特異性引物進行PCR,該方法一次只能檢測一個位點。

 

樣品準備條件:

細胞樣品:收集細胞后放入液氮中速凍保存或速凍24 h后轉(zhuǎn)入-80 °C冰箱保存。

組織樣品:動物組織一般取材后立即放入液氮中速凍保存,液氮凍存24 h后可轉(zhuǎn)入-80 °C冰箱保存。特殊組織(植物等)建議直接進行甲基化檢測實驗。

所有樣品的處理和保存過程中,切忌反復凍融。

   樣品運輸條件:樣品運輸條件根據(jù)實驗樣品的處理條件,可以選擇液氮或者干冰運輸。

 

您只需提供:

 

新鮮且足量的樣品(組織不少于50 mg,細胞不少于107,全血不少于500 μl),或純化好的符合實驗要求的DNA≥ 5 μg/樣),檢測的基因信息,相關文獻等。

 

我們提供:

 

實驗報告單,MSP電泳圖/BSP測序圖等。

 

 


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