【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：犬源性成分（Canine）核酸檢測(cè)試劑盒（熒光PCR法）

Name：Canine derived ingredients Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包裝規(guī)格】10T/盒     

【預(yù)期用途】

在動(dòng)物產(chǎn)品原料和加工產(chǎn)品中，經(jīng)常出現(xiàn)成分的摻假造假和無意污染現(xiàn)象，為確保加工產(chǎn)品的真實(shí)性，國(guó)內(nèi)外研究人員建立了犬源性成分的檢測(cè)方法。

本試劑盒適用于動(dòng)物組織以及食品、飼料等樣本中犬源性成分的檢測(cè)。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒采用TaqMan探針法實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)，設(shè)計(jì)一對(duì)犬源性成分基因保守區(qū)特異性引物，結(jié)合一條特異性探針，用熒光PCR技術(shù)對(duì)犬源性成分基因保守區(qū)的DNA進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)，從而達(dá)到快速檢測(cè)之目的。

【試劑組成】

說明：不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用。

【儲(chǔ)存條件及有效期】-20℃±5℃，避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過5次，有效期12個(gè)月。

【適用儀器】ABI 、安捷倫MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列熒光定量PCR檢測(cè)儀。

【標(biāo)本采集】取動(dòng)物組織及其制品、食品或飼料約1g。

【保存和運(yùn)輸】上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長(zhǎng)期保存可置-70℃，但不能超過6個(gè)月，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用2~8℃冰袋運(yùn)輸，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

【使用方法】

1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1 樣本前處理

取動(dòng)物組織及其制品、食品或飼料約1g，手術(shù)剪剪碎混勻后取0.5g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至1.5mL滅菌離心管中，8000rpm離心2min，取上清液100μL于1.5mL滅菌離心管中。

1.2 核酸提取

推薦采用廣州維伯鑫生物科技股份有限公司生產(chǎn)的核酸提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進(jìn)行核酸提取，請(qǐng)按照試劑說明書進(jìn)行操作。

2. 試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù)，設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照；樣品每滿10份，多配制1份)，每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：

將混合好的測(cè)試反應(yīng)液分裝到PCR反應(yīng)管中，21uL/管。

3. 加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟1提取的核酸、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取4μL，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

4. PCR擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）

4.1 將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量PCR儀反應(yīng)槽內(nèi)；

4.2 設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為25μL；

熒光通道選擇： 檢測(cè)通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI系列儀器請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光，選擇None即可。

4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

【注意事項(xiàng)】

1.所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行；

2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化，完全混勻并短暫離心；

3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存；

4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服；

6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行，以免交叉污染；

7.實(shí)驗(yàn)完畢后用10%次氯酸或75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器；

8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。

【參考文獻(xiàn)】

[1]國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢驗(yàn)總局. GB/T 21105-2007 動(dòng)物源性飼料中狗源性成分定性檢測(cè)方法-PCR方方法[S]. 北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社, 2007.

[2]國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢驗(yàn)總局. SB/T 10923-2012 肉及肉制品中動(dòng)物源性成分的測(cè)定 實(shí)時(shí)熒光PCR法[S]. 北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社, 2012.

[3]熊蕊, 郭鳳柳, 劉曉慧. 肉制品中犬源性成分PCR檢測(cè)方法的建立[J]. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展, 2014.

【生產(chǎn)企業(yè)】

企業(yè)名稱：廣州維伯鑫生物科技股份有限公司 郵 編：510663

生產(chǎn)地址：廣州高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)科學(xué)城科豐路31號(hào)G11棟201號(hào)

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