細(xì)胞真的很脆弱，就像小嬰兒一樣，需要你無微不至的關(guān)懷

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在還沒有開始培養(yǎng)它們之前，你就需要做好這些準(zhǔn)備。

包括耗材的處理、試劑的配置，無菌檢驗等等。

玻璃器皿的清洗，對于玻璃器皿（細(xì)胞瓶、裝營養(yǎng)液的瓶子、小青霉素瓶等）要用洗衣粉刷干凈（注意死角），然后沖干凈。用酸液浸泡 24 h 以上，之后用清水沖洗數(shù)遍，除去殘留酸液。瓶子之類，沖洗過程要使勁搖晃。

試劑配置，細(xì)胞培養(yǎng)用的液體一般使用雙蒸以上的水即可。并注意 pH 值的調(diào)節(jié)。

無菌檢驗，主要采用過濾除菌：如胰酶、抗生素、G-418 溶液、各類培養(yǎng)基、丙酮酸鈉、谷氨酰胺等。有些可以采用高壓滅菌：如 PBS、D-Hank's等。

不同細(xì)胞對培養(yǎng)基的要求是不同的，要根據(jù)自己的細(xì)胞要求使用。

至于實驗操作，腦子里時刻提醒自己“無菌”；

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實驗進(jìn)行前，超凈臺以紫外燈照射 30 分鐘滅菌，以 70 % ethanol 擦拭無菌操作臺面，并開啟超凈工作臺風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)數(shù)分鐘后，才開始實驗操作。

每次操作只處理一株細(xì)胞株，避免細(xì)胞間交叉污染。

實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，再次以 70 % ethanol 擦拭無菌操作臺面。實驗用品以 70% 乙醇擦拭后才帶入無菌操作臺內(nèi)。實驗操作應(yīng)在中央無菌區(qū)域，一般不要再邊緣區(qū)域操作。

你最好做到每天都去探望探望它們，看看他們的成長情況

1、檢查培養(yǎng)液顏色與透明度的變化，顏色變黃，說明PH值下降；變紅或紫紅色，說明PH值上升，細(xì)胞生長停滯、死亡，一般生長穩(wěn)定的細(xì)胞2-3天換液一次，生長緩慢的細(xì)胞可3-4天換液一次。

2、觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，細(xì)胞長滿瓶底的80%，應(yīng)及時傳代。

3、觀察細(xì)胞形態(tài)變化，細(xì)胞透明度大、折光性強(qiáng)、輪廓清晰為佳。

4、注意微生物污染，常常出現(xiàn)培養(yǎng)液混濁，液體內(nèi)漂菌絲或細(xì)胞菌，不僅僅指微生物，包括所有混入培養(yǎng)環(huán)境中的細(xì)胞生存有害的成分和造成細(xì)胞不純的異物及細(xì)胞。

如果你培養(yǎng)的細(xì)胞被污染了，無非是下面幾個污染途徑：

1、空氣是微生物傳播的最主要途徑，操作時盡量避免說話、咳嗽、打噴嚏；

2、使用的培養(yǎng)器械及器皿清洗消毒不徹底；

3、培養(yǎng)兩種以上細(xì)胞時，操作不規(guī)范，可能導(dǎo)致細(xì)胞交叉污染；

4、血清有問題，可能血清在生產(chǎn)時就已經(jīng)被支原體或病毒污染；

5、原代培養(yǎng)的污染多數(shù)來源于組織樣本。

注意問題：操作全過程要求無菌、胰酶消化時間要適度、吹打細(xì)胞時用力要適度，盡量減少氣泡