【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：犬瘟熱病毒（CDV）核酸檢測(cè)試劑盒（熒光PCR法）

Name：Canine Distemper Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包裝規(guī)格】10T/盒         

【預(yù)期用途】

犬瘟熱是由犬瘟熱病毒(Canine Distemper Virus, CDV)引起的一種急性、高度接觸性傳染病。該病廣泛分布于世界各地，是當(dāng)前危害犬群最嚴(yán)重的疫病之一，對(duì)其它犬科動(dòng)物、鼬科動(dòng)物和貓科動(dòng)物也具有較大危害。CDV感染臨床癥狀，根據(jù)病毒種屬、環(huán)境因素以及個(gè)體對(duì)感染的反應(yīng)不同而輕重不同。臨床癥狀主要局限于上呼吸道，所以咳嗽、流鼻涕會(huì)很明顯。未經(jīng)免疫的幼犬很可能出現(xiàn)嚴(yán)重癥狀，如肺炎、腹瀉、脫水、厭食等^[1]。犬瘟熱的傳染性極強(qiáng)，且發(fā)病率高，常?？梢鸫笈康娜?、貂、狐及部分野生動(dòng)物發(fā)病，致死率可達(dá)30%-80％，給毛皮動(dòng)物產(chǎn)業(yè)和野生動(dòng)物保護(hù)業(yè)造成了重大經(jīng)濟(jì)損失。目前，本病缺乏特效的治療方法，早期診斷及早使用抗血清是治療該病的重要措施。

本試劑盒適用于檢測(cè)的犬肝、脾、肺等組織、血液、血清、淚液、鼻液、唾液、糞便。等標(biāo)本中犬瘟熱病毒RNA，適用于犬瘟熱病毒感染的輔助診斷。其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒采用TaqMan探針法實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)，設(shè)計(jì)一對(duì)犬瘟熱病毒特異性引物，結(jié)合一條特異性探針，用熒光PCR技術(shù)對(duì)犬瘟熱病毒的RNA進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)，用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。

【試劑組成】

說明：不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用。

【儲(chǔ)存條件及有效期】-20℃±5℃，避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過5次，有效期12個(gè)月。

【適用儀器】ABI 、安捷倫MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列熒光定量PCR檢測(cè)儀。

【標(biāo)本采集】病死犬可采集肝、脾、肺、等組織；活犬可采集血液、血清、淚液、鼻液、唾液、糞便。

【保存和運(yùn)輸】

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長(zhǎng)期保存可置-70℃，但不能超過6個(gè)月，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用2~8℃冰袋運(yùn)輸，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

【使用方法】

1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1 樣本前處理

組織樣品：每份組織分別從3個(gè)不同的位置稱取樣品約1g，手術(shù)剪剪碎混勻后取0.5g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至1.5mL滅菌離心管中，8000rpm離心2min，取上清液100μL于1.5mL滅菌離心管中；咽拭子樣品直接取100μL于1.5mL滅菌離心管中。

1.2 核酸提取

推薦采用廣州維伯鑫生物科技股份有限公司生產(chǎn)的核酸提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進(jìn)行核酸提取，請(qǐng)按照試劑說明書進(jìn)行操作。

2. 試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù)，設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照；樣品每滿10份，多配制1份)，每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：

將混合好的測(cè)試反應(yīng)液分裝到PCR反應(yīng)管中，21uL/管。

3. 加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟1提取的核酸、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取4μL，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

4. PCR擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）

4.1 將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量PCR儀反應(yīng)槽內(nèi)；

4.2 設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為25μL；

熒光通道選擇： 檢測(cè)通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI系列儀器請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光，選擇None即可。

4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

【注意事項(xiàng)】

1.所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行；

2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化，完全混勻并短暫離心；

3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存；

4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服；

6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行，以免交叉污染；

7.實(shí)驗(yàn)完畢后用10%次氯酸或75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器；

8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。

【參考文獻(xiàn)】

[1] 劉雯, 夏志平, 靳朝. 犬瘟熱研究進(jìn)展[J]. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展, 2010, 31(8): 83-87.

[2] 國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局. GB/T 27532-2011 犬瘟熱診斷技術(shù)[S].

【生產(chǎn)企業(yè)】

企業(yè)名稱：廣州維伯鑫生物科技股份有限公司 郵 編：510663

生產(chǎn)地址：廣州高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)科學(xué)城科豐路31號(hào)G11棟201號(hào)

電子郵箱：info@vipotion.com 電 話：020-66377266

公司網(wǎng)址：http://www.yjl725.cn 傳 真：020-66377267