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犬細小病毒(CPV)核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)

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【產(chǎn)品名稱】

通用名稱:犬細小病毒(CPV)核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)

Name:Canine Parvovirus Detection Kit(Real-Time PCR Method)

【包裝規(guī)格】10T/盒       

                                                      

【預(yù)期用途】

犬細小病毒(Canine Parvovirus, CPV)可引起犬的劇烈嘔吐、出血性腸炎、脫水、白細胞減少和心肌炎等癥狀。臨床上犬細小病毒病可分為腸炎型和心肌炎型,對犬造成很大危害。CPV有3種亞型,主要是在VP2蛋白上有基因差異,即CPV-2a、CPV-2b、CPV-2c[1]。感染CPV的犬主要通過糞便向外排毒,因此糞便是犬間傳遞感染的主要傳染源。CPV常規(guī)檢測方法主要有病毒分離鑒定、血凝和血凝抑制試驗、ELISA和PCR等方法。PCR法靈敏度高、特異性強、操作簡單,已被廣泛用于CPV診斷[2-3]。

本試劑盒適用于檢測樣本中的犬細小病毒,用于犬細小病毒感染的輔助診斷。

 

【檢驗原理】

本試劑盒采用TaqMan探針法實時熒光PCR技術(shù),設(shè)計一對犬細小病毒特異性引物,結(jié)合一條特異性探針,用熒光PCR技術(shù)對犬細小病毒的DNA進行體外擴增檢測,用于臨床上對可疑感染者的病原學(xué)診斷。

 

【試劑組成】

包裝規(guī)格

25T/盒

50T/盒

CPV反應(yīng)液

     500μL×1管

     500μL×2管

酶液

       25μL×1管

       50μL×1管

CPV陽性質(zhì)控品

      50μL ×1管

      50μL ×1管

陰性質(zhì)控品

     250μL ×1管

     250μL ×1管

 

說明:不同批號的試劑盒組分不可交互使用。

 

【儲存條件及有效期】-20℃±5℃,避光保存、運輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過5次,有效期12個月。

 

適用儀器ABI 、安捷倫MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列熒光定量PCR檢測儀。

 

【標本采集】病死犬可采集淋巴結(jié)、脾、肺、等組織;活犬可采集血液、血清、糞便等。

 

【保存和運輸】

上述標本短期內(nèi)可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過6個月,標本運送應(yīng)采用2~8℃冰袋運輸,嚴禁反復(fù)凍融。

 

使用方法

1. 樣品處理(樣本處理區(qū))

1.1 樣本前處理

組織樣品:每份組織分別從3個不同的位置稱取樣品約1g,手術(shù)剪剪碎混勻后取0.5g于研磨器中研磨,加入1.5mL生理鹽水后繼續(xù)研磨,待勻漿后轉(zhuǎn)至1.5mL滅菌離心管中,8000rpm離心2min,取上清液100μL于1.5mL滅菌離心管中;咽拭子樣品直接取100μL于1.5mL滅菌離心管中。

1.2 核酸提取

推薦采用廣州維伯鑫生物科技股份有限公司生產(chǎn)的核酸提取或純化試劑(磁珠法或離心柱法)進行核酸提取,請按照試劑說明書進行操作。

2. 試劑配制(試劑準備區(qū))

根據(jù)待檢測樣本總數(shù),設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照;樣品每滿10份,多配制1份),每測試反應(yīng)體系配制如下表:

試劑

CPV反應(yīng)液

酶液

用量(樣本數(shù)為N)

20μL

1μL

 

將混合好的測試反應(yīng)液分裝到PCR反應(yīng)管中,21uL/管。

3. 加樣(樣本處理區(qū))

將步驟1提取的核酸、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取4μL,分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。

4. PCR擴增(核酸擴增區(qū))

4.1 將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量PCR儀反應(yīng)槽內(nèi);

4.2 設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為25μL;

熒光通道選擇: 檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,ABI系列儀器請勿選擇ROX參比熒光,選擇None即可。

4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:

步驟

循環(huán)數(shù)

溫度

時間

收集熒光信號

1

1 cycle

95℃

10min

2

40 cycles

94℃

15sec

55℃

30sec

 

注意事項

1.所有操作嚴格按照說明書進行;

2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,完全混勻并短暫離心;

3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存;

4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服;

6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行,以免交叉污染;

7.實驗完畢后用10%次氯酸或75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;

8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待,并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通則》進行處理。

 

參考文獻

[1] Wang S J, Yang S T, Cheng C F, et al. Isolation and identification of canine parvovirus and sequence analysis of its VP2 gene [J]. Progress in Modern Biomedicine, 2009, 10, 26.

[2]李英俊, 史利軍, 李剛, 等. 犬細小病毒熒光定量PCR檢測方法的建立與評價[J]. 中國獸醫(yī)學(xué)報, 2010, 30(12): 1594-1597.

[3]劉海防, 胡傳偉, 謝之景, 等. 犬細小病毒Taqman熒光定量PCR檢測方法的建立[J]. 中國獸醫(yī)學(xué)報, 2010, 29(1): 36-40

[4]國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局. GB/T 27533-2011 犬細小診斷技術(shù)[S].

 

【生產(chǎn)企業(yè)】

企業(yè)名稱:廣州維伯鑫生物科技股份有限公司 郵 編:510663

生產(chǎn)地址:廣州高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)科學(xué)城科豐路31號G11棟201號

電子郵箱:info@vipotion.com 電 話:020-66377266

公司網(wǎng)址:http://www.yjl725.cn 傳 真:020-66377267


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